| Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023 | Resumo: 894-1 | ||||
Resumo:A Mycobacterium tuberculosis (Mtb) é um patógeno milenar que possui diversos mecanismos de defesa ao sistema imunológico. O cenário atual é de um tratamento longo, com uma crescente resistência microbiana e com uma mortalidade alta. Nesse sentido, a Organização Mundial da Saúde (OMS) caracteriza a incidência de cepas de Mtb multirresistentes a drogas (MDR-TB) como uma crise da saúde pública. Em vista disso, a pesquisa e desenvolvimento de novos fármacos contra MDR-TB se faz extremamente necessária. O presente estudo objetivou avaliar a aplicação do peptídeo antimicrobiano Ctx(Ile²¹)-Ha-Ahx-Cys (Ctx-SH) funcionalizado em matrizes de nanoquitosana carregadas com rifampicina frente a tuberculose resistente. Para o desenvolvimento do sistema foram previamente modificadas as matrizes de quitosana com N-acetilcisteína através do método de carbodiimida. Posteriormente foi funcionalizado o Ctx-SH à matriz mediante ligações espontâneas de ponte dissulfeto durante 24 h e em pH 8. As nanopartículas da quitosana modificada (NPQ) foram obtidas por gelificação iônica utilizando tripolifosfato de sódio e carregadas com rifampicina. Tanto as modificações da quitosana como das NPQ, analisaram-se os parâmetros físico-químicos mediante espectroscopia do infravermelho com transformada de Fourier (FTIR) /Raman, potencial Zeta, Espalhamento de raios-X a baixo ângulo (SAXS) e espectrometria fluorescente sincronizada. A atividade antimicrobiana foi realizada em laboratório de biossegurança nível 3 com as cepas H37Rv (padrão), CF110 (MDR-TB) e CF169 (extensivamente resistente) incubadas em caldo 7H9 suplementada com ácido oleico, albumina, dextrose e catalase a 37°C e 5% CO2; e lidas utilizando por fluorescência com 0,01% resazurina após 7 dias. Foi realizado o teste de citotoxicidade do sistema frente a macrófagos (J774). A inserção e mapeamento das NPQ em macrófagos foi avaliada utilizando um microscópio confocal após de 24 h com as NPQ conjugadas ao isotiocianato de fluoresceína. Os resultados das espectroscopias corroboram com a hipótese da funcionalização do peptídeo Ctx-SH ao sistema quitosana-N-acetilcisteína pois ao comparar as três espectroscopias, há um aumento gradual da intensidade de diversas bandas e a formação de ligações de pontes dissulfeto. Enquanto que o potencial Zeta igual a +37 mV confirmou uma alta estabilidade de aplicação. Os estudos de inibição bacteriana revelaram que as NPQ conjugadas ao peptídeo antimicrobiano carregadas com rifampicina possuem melhor atividade que a rifampicina isolada frente a CF110 e CF169 com uma concentração inibitória mínima de 0,977ug/mL similar à cepa padrão (< 0,977ug/mL). Além disso, foi demonstrado que as NPQ seriam capazes de ingressar ao macrófago sem produzir toxicidade (IC50 > 50 ug/mL) otimizando assim a atividade da rifampicina. Ademais as NPQ seriam capazes de interagir com diversos receptores de membrana analisados in silico. Portanto, é possível aferir que a nanobioconjugação do composto Ctx-SH-N-acetilcisteína-quitosana é capaz de revitalizar a atividade de fármacos obsoletos frente ao atual cenário de resistência da tuberculose. Palavras-chave: Mycobacterium tuberculosis, nanobioconjugação, peptídeos antimicrobianos Agência de fomento:Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo | |||||